末端吸收定义:
1、待测组分没有共轭结构(没有π-π*跃迁吸收光)
2、待测组分存在氧、硫、卤素、氮等原子(n→σ*或n→π*跃迁吸收光)
3、检测波长<待测组分截止波长
4、通常≤230nm
关于末端吸收组分,检测时常出现的问题:基线噪音大,平衡时间长;不出峰或响应值低的问题;几个月后再做相同实验相同浓度样品峰面积变小(甚至不出峰);几个月后新买色谱柱基线再也平衡不了,漂移严重。
很多客户第一怀疑对象便是色谱柱质量问题,出现这种现象,其原因其实最可能在于仪器本身,比如有机溶剂选择不当,流动相缓冲盐选择不当,流动相试剂级别、品质和配制问题,流动相混合方式,氘灯能量不足。所以遇到这类问题,不能盲目的判定,要从各个方面分析问题所在。
其中氘灯能量问题在末端吸收组分检测中尤为常见,且影响颇深。因此实验中我们需要密切关注氘灯使用时长及点灯次数,能量值会直接影响220nm波长以下物质的检测结果,通常氘灯使用在2000小时内,不会出现问题,超过则需要密切注意,当能量不足时,波长越低,峰响应值会越小,基线噪音更大,更难平衡,若样品浓度同样低情况下,甚至出现不出峰现象,请看下面案例:
氘灯能量直接关联峰响应值及基线
案例1:有机酸检测
色谱柱:GOWON Polar-MS 2.7um 150x4.6mm (PN : 0737-1546)
流动相:乙腈-0.1%磷酸溶液(2 : 98)
流速:1ml/min
柱温:25℃
检测波长:210nm
进样量:1ul
指标组分:甲酸、乙酸、柠檬酸
仪器:Thermo U3000
同样波长下,同型号仪器(U3000),氘灯使用时长不同,氘灯能量对比
基线噪音对比:
以上图谱中,甲酸、乙酸、柠檬酸浓度一致,进样量一致,用同型号的两台仪器测试,对比可看出,氘灯能量越低,峰响应值越低,基线噪音越大。
相同系统,相同氘灯,设置其他波长正常
案例2:不同波段溶剂峰测试
色谱柱:GOWON C18 2.7um 50x4.6mm (PN : 0726-0546)
流动相:乙腈-水(65 : 35)
流速:1ml/min
柱温:25℃
检测波长:全波长3D扫描(提取210nm、205nm、200nm、195nm、254nm信号)
仪器:Thermo U3000
检测器:DAD
溶剂:甲醇
进样量:2ul、4ul、6ul、8ul、10ul
分别设置5种不同进样量,提取5个不同波长数据,观察溶剂峰峰高变化趋势,以上曲线中,横坐标为进样量,纵坐标为甲醇峰高,波长越低,相同样品量紫外检测器的响应值越高,样品量变化引起响应值变化越明显!
表明,波长大小直接影响基线,对低波长下,更加灵敏,因此,末端吸收条件下,要更加注意氘灯的能量值,只有保证能量充足,才能够更加准确的检出。
关于氘灯的建议:
1、关注氘灯的能量值,使用末端吸收检测波长时,对氘灯能量有更高的要求!
2、关注氘灯使用时长,超过2000h则需注意能量值是否足够;
3、点灯次数太频繁也会对氘灯能量有一定影响;
4、开机时,先保证有流动相流过检测器,再打开紫外灯,关机时,先关闭紫外灯,再通泵,避免紫外灯干烧;
5、使用原厂氘灯,会有更高能量值和更长使用寿命;
5、长期使用非原厂替代氘灯,会影响检测器的灵敏度和稳定性。