苯甲酸和山梨酸是食品工业常用的防腐剂，通过抑制酵母菌和其他细菌的繁殖，达到延长食品保质期的效果。但是，含防腐剂的食品被食用进入人体后，苯甲酸、山梨酸不可避免地会对我们人体内的益生菌产生抑制作用，导致消化不良或引起其他影响健康问题。糖精钠是食品工业常用的甜味剂，改善食品口感，减少糖的摄入；但过量的糖精钠摄入，会影响肠胃消化酶的正常分泌，降低小肠的吸收能力，使食欲减退。因此，投放市场的食品，苯甲酸、山梨酸和糖精钠都需要控制用量。

《GB 5009.28-2016 食品安全国家标准 食品中苯甲酸、山梨酸、糖精钠的测定》是食品监管和食品检测机构高频使用的标准，是保障人民食品安全的法律依据和技术准则。但在实际使用中，很多检测机构会碰到“色谱柱寿命太短”问题，并质疑色谱柱的品牌、批次等问题……

太玮科技拥有专业技术团队可提供专业的色谱分析技术方案和色谱耗材产品，可供应行业内Top 6中多个品牌产品，可以很负责的说：按GB 5009.28-2016标准方法检测山梨酸、苯甲酸和糖精钠，色谱柱寿命短和色谱柱本身质量没有必然关系！

色谱柱症状：用不了多久，色谱峰出现肩峰或分叉峰。

原因分析：

1、标准样品前处理方法不适用于所有基质的样品。

一般试样标准前处理方法：取样品2g，加水25mL涡旋混合，50℃水浴超声20min，冷却至室温后加亚铁氰化钾溶液2mL和乙酸锌溶液2mL,混匀(沉淀蛋白、果胶等成分），于8000r/min离心5min,将水层移到50mL容量瓶中，于残渣中加水20mL,涡旋混匀后超声5min,于8000r/min离心5min,将水层移到50mL容量瓶中,并用水定容至刻度，混匀，取适量上清液过0.22um滤膜，待液相色谱测定。

关键步骤：加亚铁氰化钾溶液2mL和乙酸锌溶液2mL的蛋白质沉淀作用

关键问题：蛋白沉淀剂量够吗？如果沉淀剂用量不够，样品中的蛋白质无法充分沉淀完全，会导致样品溶液中依然含有一定量蛋白质。蛋白质随样品溶液进样进入色谱柱，会在色谱柱柱头蓄积，并导致色谱峰慢慢变得拖尾、进而肩峰、进而分叉，色谱柱卒……

首先了解一下蛋白沉淀原理：

乙酸锌[Zn(CH3COO)2·2H2O]与亚铁氰化钾 K4[Fe(CN)6] 反应生成白色的亚铁氰酸锌沉淀来吸附蛋白质等干扰物质，发生共同沉淀作用。

亚铁氰化钾可配合乙酸锌形成复合蛋白质沉淀剂，对清除蛋白质能力强，但脱色能力差，适用于色泽较浅，蛋白质含量较高的样液的澄清，如肉制品、乳制品、豆制品等；对可溶性多糖类、可溶性纤维素类、脂肪类等清除能力较弱。

不用类型样品蛋白质的含量不同，富含蛋白质的样品，比例肉类罐头、火腿肠、广式肉粽、广式月饼等，标准规定的2mL沉淀剂的用量为2mL,未必能充分去除蛋白质，因此，我们建议根据样品类型和基质，更灵活的调整沉淀剂的用量。

1、针式过滤器的选择

亚铁氰酸锌复合溶液沉淀蛋白质过程，当样品溶液中蛋白质含量较少，沉淀剂有富余的时候，样品溶液过滤时会“更困难”一些，选用高品质的针式过滤器时，会感觉压力偏大。如果这个时候为了追求过滤“手感”，选用压力更低的针式过滤器，实际过滤效果会大打折扣，从而影响过滤效果，导致色谱柱污染加快，寿命变短。赛默飞新推出针式过滤器有更高的过滤效率，买一送一促销活动进行中：400-7788-668

3、色谱柱清洗方法不合理。一旦检测样品中含有蛋白质无法充分被沉淀去除，色谱柱柱头就会有蛋白质蓄积，量少的时候对分析影响不大。但清洗色谱柱时，我们通常会先用甲醇-水（5:95）冲洗20倍柱体积量，把乙酸铵清洗干净，之后逐渐升高甲醇比例至100%，问题就在这个时候出现了！少量蛋白蓄积确实不影响色谱峰的峰形，但当甲醇比价增加至75%，蛋白质会变性并改变结构把色谱柱柱头填料完全包裹，下次做样的时候，就会导致峰形严重拖尾或分叉！

解决方案：

1、根据样品基质调整沉淀剂的用量。

注：可以根据产品标签大致判断样品中蛋白质含量。

Tips：离心管中加入陶瓷均质子可以增强蛋白沉淀效率；8000r/min离心速率是必要的，否则会影响蛋白质和沉淀剂絮凝物的沉淀效率，从而导致针式过滤器难以过滤样品溶液。

1、使用高品质保护柱。高品质保护柱不会改变色谱柱的分离和峰形，连接于色谱柱前端，一旦样品溶液中混有蛋白质，蛋白质会在吸附在保护柱芯上，而不会污染到色谱柱！

另外，根据GB 5009.28-2016标准前处理方法，如果样品溶液中含有少量脂肪类成分，（亚铁氰酸锌复合溶液不能有效去除脂肪），保护柱芯可以100%吸附，避免色谱柱被脂肪类物质污染。买色谱柱赠送保护柱促销活动进行中。。。。

2、优化色谱柱清洗方法：用甲醇-水（5:95）冲洗20倍柱体积量，把乙酸铵清洗干净后，拆下保护柱（避免保护柱芯上吸附蛋白由于有机溶剂用量的增加逐渐被冲到色谱柱上），逐渐升高甲醇比例至70-75%，继续冲洗10倍柱体积，即可停泵拆下色谱柱正常保存。

3、使用专用色谱柱再生清洗溶剂，让您的色谱柱起死回生！

再生清洗前图谱                               

色谱柱再生清洗溶剂简介：此为太玮科技自主研发的色谱柱再生清洗溶剂，由A、B、C三瓶再生剂组成，根据特定的配制方法和清洗程序，无需打开色谱柱柱螺帽进行修补重填，即可对已经被严重污染的色谱柱进行再生。供货号：SL0-120。详细资料请联系您的技术代表，或致电400-7788-668。

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