黄曲霉毒素(Aflatoxins, AFT)是由黄曲霉和寄生曲霉的某些菌株产生的一种双呋喃环类毒素,其结构中含有二呋喃环和氧杂萘邻酮,具备很强的毒性、致畸性、致癌性和致突变性。黄曲霉毒素主要存在于土壤、坚果,特别是花生和核桃中。在玉米、大豆、稻谷、牛奶、奶制品、食用油等食品中会有黄曲霉毒素检出,一般以热带和亚热带等南方高温、高湿地区受污染最为严重。黄曲霉毒素耐热,一般烹调加工温度下难以破坏。
黄曲霉毒素主要有B1、B2、G1、G2、M1、M2,农业农村部、国家质检总局和市场监督管理局一致规定黄曲霉毒素是相关食品的必检项目之一。本文参考《GB 2761-2017 食品安全国家标准 食品中真菌毒素限量》、《GB 5009.22-2016 食品安全国家标准 食品中黄曲霉毒素B族和G族的测定》第三法 高效液相色谱-柱后衍生法、《2020版中国药典四部》黄曲霉测定方法,使用黄曲霉总量免疫亲和小柱(PN: 60301-1020)净化,AF C18 II(PN: 0397-2546)进行分离,结合高效液相色谱光化学柱后衍生对黄曲霉毒素进行分析,灵敏度高,分离度优,满足标准要求。
样品制备:
1.样品提取:称取 5g 试样(精确至 0.01g)于 50mL 离心管中,加入 1g 氯化钠和 25mL70%甲醇水溶液,涡旋混匀,置于超声波中振荡 10min,在 6000r/min 下离心 10min,取 10mL上清液,加 20mL 水稀释,混匀,用玻璃纤维滤纸过滤,收集滤液备用。
2.样品净化:将低温下保存的黄曲霉毒素总量免疫亲和柱恢复至室温,取上述滤液 15mL,以 1-2 滴/秒的速度通过免疫亲和柱,弃去流出液;加 10mL 水清洗免疫亲和柱,弃去流出液并排干免疫亲和柱内所有液体;加入 1mL 甲醇缓慢洗脱,收集洗脱液,定容,用0.22μm 微孔滤膜过滤,作为待测溶液,HPLC 测定。
色谱条件:
色谱柱:JADE-PAK 5μm AF C18 II 250×4.6mm
产品货号:0397-2546
流动相:
A:乙腈:甲醇(50:50)
B:水
A:B = 32:68
流速:1.0ml/min
柱温:40℃
检测波长:激发波长 360nm,发射波长 440nm
进样体积:20μL
供货信息:
货号 |
描述 |
60101-1015 |
TargPurify 黄曲霉毒素总量免疫亲和柱 150ng/1mL |
60301-1020 |
TargPurify 黄曲霉毒素总量免疫亲和柱 200ng/3mL |
F101322-100 |
PTFE 滤器(有机系)13mm 0.22μm |
0397-2546 |
JADE-PAK 5μm AF-C18 II 250×4.6mm |
定制 |
标准品:黄曲霉毒素B1、黄曲霉毒素B2、黄曲霉毒素G1、黄曲霉毒素G2、黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2混合液
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