示差折光(RID)检测器-糖成分分析
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方案简介

许多检测器用于医药实验室质量控制(QC)分析,如紫外线、荧光、带电气溶胶、蒸发光散射和示差折光(RID)检测器。然而,由于分析物的化学性质不同,这些检测器都不能推广到所有药物的直接分析。如果紫外和荧光检测器对某些药物不敏感,RID是最好的选择。在大多QC实验室中,RID在简单性、成本、能耗和可用性方面具有很大优势,且在食品、化学和药物分析中有很多应用,例如检测脂类[1]、碳水化合物[2,3]、蛋白质[4]和蛋白质-核酸复合体[5]。


原理

示差折光检测器(Refractive Index Detector,RID)是一种通用型检测器。其原理是待测物与流动相折射率差。对于偏转式示差折光检测器,光路在通过两个装有不同液体的检测池时发生偏转,偏转的大小与两种液体之间折光率的差异成比例。光路的偏转由光敏元件上的位移测得,显示了折光率的不同。



1.光束 2.样品池 3.参比池 4.ns>nr时的光束 5.ns=nr时的光束 6.位移 7.光敏接收原件ns样品腔中液体的折射率 nr参比腔中液体的折射率

光学系统

从钨灯发射出的光束经过聚光透镜,狭缝1,准直镜和狭缝2,再透过检测池,然后光被检测池后的反光镜反射,再通过检测池、狭缝2、准直镜和零位玻璃调节器后在光敏元件上显示出狭缝1的影象。光敏元件上有两个并排的光敏接收元件。


1.钨灯 2.聚光透镜 3.狭缝1 4. 准直镜5. 狭缝26.检测池 7. 反光镜 8. 零位玻璃 9.光接收元件


注意事项

当流动相中含有高浓度的盐时,用完后一定要用水彻底的冲洗,否则将会由于堵塞流路而中断检测器的工作。不要使用任何可能腐蚀材料(比如不锈钢)的流动相,包括盐酸。使用这种流动相可能引起基线漂移,损害检测器。用彻底脱气过的流动相,单元泵(预混合流动相)。温度、压力和流动相组成的微小变化会产生极大的影响,应控制其变化,保持稳定性,减少基线噪音。RID的系统冲洗平衡,需要保证流路中的流动相被完全替换,使仪器达到完全稳定,充分平衡基线。现采用太玮科技Prevail Carbohydrate ES和JADE-PAK® Carbohydrate Ca2+ 色谱柱利用RID进行蜂蜜和甘露醇中糖成分的检测,文中检测标准参考2020版中国药典一部 二部方法,测得柱效N>2000,分离度>2, 符合标准要求。



应用一

蜂蜜:果糖、葡萄糖、蔗糖、麦芽糖色谱柱:Prevail Carbohydrate ES  150×4.6mm,2.7μm P/N:9243-1546检测器:RID流动相:乙腈-水(82:18)预混合柱温:室温进样量:15μL流速:1mL/min

对照品谱图:



应用二



甘露醇 山梨醇色谱柱:JADE-PAK® Carbohydrate Ca2+ 8%  300mm×7.8mm  P/N:0219-3078检测器:RID流动相:水柱温:80℃进样量:20μL流速:0.5mL/min对照品谱图:

结论

 Prevail Carbohydrate ES是专为分离单糖和双糖类物质而设计的产品,一般使用乙腈水溶液作为流动相,兼容 ELSD,低柱流失;JADE-PAK® Carbohydrate Ca2+色谱柱用于单糖、糖醇、双糖等物质的分离,具有流动相简单,高性能色谱柱。


参考文献[1] A.I. Hopia, V.-M. Ollilainen, Comparison of the evaporative light scattering detector (ELSD) and refractive index detector (RID) in lipid analysis, J. Liq. Chromatogr. 16 (12) (1993) 2469–2482.[2] D.O. Hancock, R.E. Synovec, Microbore liquid chromatography and refractive index gradient detection of low-nanogram and low-ppm quantities of carbohydrates, J. Chromatogr. A. 464 (1991) 83–91.[3] J.L. Ch´avez-Servın, ́ A.I. Castellote, M.C. L´opez-Sabater, Analysis of mono- and disaccharides in milk-based formulae by high-performance liquid chromatography with refractive index detection, in, J. Chromatogr. A, Elsevier 1043 (2) (2004) 211–215.[4] J. Wen, T. Arakawa, J. Wypych, K.E. Langley, M.G. Schwartz, J.S. Philo, Chromatographic determination of extinction coefficients of non-glycosylated proteins using refractive index (RI) and UV absorbance (UV) detectors: applications for studying protein interactions by size exclusion chromatography with light-scattering, UV, Tech. Protein Chem. 8 (1997) 113–119.[5] E. Folta-Stogniew, Characterization of Protein–Nucleic Acid Complexes by SizeExclusion Chromatography Coupled with Light Scattering, Absorbance, and Refractive Index Detectors, in: Methods Mol. Biol., Humana Press Inc., 2021: pp. 381–395. 


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